泰国试管婴儿胚胎保存的主要方法

泰国试管婴儿胚胎保存技术在人类辅助生殖治疗中非常重要。以下是一些冷胚胎保存 目前常用的保存技术主要有程序保存法和玻璃化保存法。

程序保存法

程序保存法主要采用低浓度保存剂梯度脱水，通过程序保存器缓慢冷却。主要操作步骤包括:将细胞顺序放入一系列逐渐增加储存剂浓度的溶液中梯度脱水，放入程序保存机快速冷却至-6℃植冰(人工诱导冰晶形成)，然后程序保存机慢慢冷却至-30℃～-液氮储存在80℃后。胚胎在这个过程中逐渐脱水，希望能解决泰国试管婴儿胚胎保存造成细胞损伤机制中存在的三个问题。但程序保存也存在一些问题。首先，冰晶在保存和复苏过程中形成两次，增加了损伤的机会。溶液效应（保存过程中细胞外渗透压高）和渗透性休克（复苏过程中细胞外渗透压低）尚未完全解决；其次，程序保存耗时（3小时），需要昂贵的程序保存仪。

玻璃保存法

慢速保存法，即玻璃化保存，来自大自然的启示。科学家们发现，某些类型的青蛙在冬天可以保存零下几十度，但在春天可以解冻，身体没有损伤。研究表明，这种青蛙在保存过程中含有丙三醇，而不是水作为细胞溶剂，而丙三醇在春天醒来后消失了。“玻璃化”的概念是指水或溶液快速冷却或低于-100℃～-在110℃的温度范围内，在液体和固体、非晶体和透明玻璃之间形成高粘度。玻璃化保存技术的基本原理是用高浓度的保存保护剂溶液替代细胞中的水分，并通过快速冷却将其从液体转化为非晶状固体状态，形状像玻璃。玻璃化保存鼠胚胎于1985年首次成功。目前，玻璃保存细胞已成功应用于动物卵子母细胞、血细胞和胚胎、角膜、皮肤、血管等组织，人类胚胎于1990年成功应用。

玻璃保存技术是快速保存与高浓度保存保护剂相结合的结果。快速冷却，在低温下形成透明的玻璃固体，在冷却过程中粘度高，但不形成冰晶，避免损害细胞脂质膜和骨架结构，保持细胞内外液体的正常分子和离子分布。玻璃保存的主要操作步骤很简单，包括：高浓度的保存保护剂取代细胞内外的溶液，快速冷却，极大地提高溶液粘度并固化，并储存在液氮中。

主要影响玻璃化保存效果的因素包括：

(1)保存保护剂。保存保护剂的浓度和类型是影响同一组织细胞最重要的因素。细胞外保存保护剂一般采用多糖（蔗糖、海藻糖）等大分子物质、胎牛血清蛋白聚乙二醇(BSA)和Percoll等。；细胞内的保存保护剂是二甲基亚啶、乙二醇、丙二醇等穿透性好的小分子物质。保存保护剂的毒性也是人们担心玻璃化保存的主要问题，但到目前为止，大量的临床和动物实验还没有发现这些保存保护剂对动物和人类胚胎有任何不利影响；

(2)温度下降速度。冷却速度越快越好，液氮可以直接渗入，冷却速度约为2500℃/min，玻璃化保存机的冷却速度可达135000℃/min;

(3)胚胎载体。泰国试管婴儿胚胎载体的要求是胚胎周围的保存剂应尽可能小，与液氮的间隔应尽可能小，操作简单，胚胎不易丢失。目前常用的有:拉细麦管。Cryotop、Cryotip、Cryoleaf、直接微滴法、电镜网和Cryolop。

目前，许多文献表明，泰国试管婴儿玻璃胚胎保存技术是一种非常有前途的方法，可以显著提高胚胎的复苏率和移植后患者的临床妊娠率。